人乳頭瘤病毒(HPV)16型、18型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
該試劑盒用于體外定性檢測女性宮頸細胞中的人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的DNA核酸片段。
- 産品品牌： REAGEN
- 産品貨号： RN102FP
- 産品規格： 50/100T
- 産品适用： 該試劑盒用于體外定性檢測女性宮頸細胞中的人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的DNA核酸片段。
- 産地來源： 深圳
- 保質期： 12個月
【産品名稱】
通用名稱：人乳頭瘤病毒(HPV)16型、18型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規格】
50人份/盒
【預期用途】
該試劑盒用于體外定性檢測女性宮頸細胞中的人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的DNA核酸片段。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鍊式反應（PCR）結合Taqman技術，對人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）16型和18型的特異性DNA核酸片段進行熒光PCR定量檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規格 | 數量 | ||
HPV16 18反應液 |
1020μL /管 |
1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
酶混合液 | 26μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶等 |
HPV16 18陽性對照 | 250μL /管 | 1管 | 含靶基因的重組克隆 |
HPV16 18陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 生理鹽水 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個月。本産品反複凍融應不超過5次。
【适用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動醫用PCR分析系統。
【樣本要求】
1. 适用樣本
女性宮頸拭子樣本。
2. 采集方法
先用棉拭子将宮頸口過多的分泌物擦去，用擴陰器擴陰，再換取棉拭子伸入宮頸，通過上皮交界處，直到看不到拭子頭，旋轉10-20秒，取出拭子，将拭子置于無菌玻璃管中，密閉送檢。
3. 樣本運輸和保存
樣本保存：待測樣本，可立即進行核酸提取處理；如果樣本需要在24小時内檢測，可先置于2~8℃保存；如果樣本在24小時内無法檢測，則可置于-20℃~-80℃保存，盡量避免反複凍融，導緻假陰性。
樣本運輸：采用低溫運輸，樣本運輸應遵守國家關于第二類病原微生物的相關生物安全規定。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
樣本試管中加入1ml生理鹽水，充分震蕩混勻，按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取，取待測樣本、陰性對照、陽性對照各200µL，進行後續提取。
2. 試劑配置（在準備區進行，與擴增區分開，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，确保試劑完全離心至管底，否則會出現裝量差異的現象。
若有N個待檢測樣本，則需配置N擴增反應，按下表要求進行擴增反應液的配制，配制完成後充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管15μL分裝至0.2 ml PCR管中，并做好标記，擴增反應液需現配現用。
N人份(μL) | |
HPV16 18反應液 | N×19.5 |
酶混合液 | N××0.5 |
總量 | N××20 |
3. 加樣（在樣品處理區進行，冰上操作）
按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序，分别取5μL，加入至已分裝擴增反應液的八聯管中，反應總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心後置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應（在擴增區進行）
選擇FAM通道檢測HPV 16型核酸，選擇ROX通道檢測HPV 18型核酸，選擇CY5通道檢測内标。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 | |
1 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
2 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
3 | 退火延伸及熒光檢測 | 60℃ | 30 sec | |
報告熒光：FAM、ROX、CY5；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質量控制
FAM通道Ct值 | ROX通道Ct值 | CY5通道Ct值 | |
陰性對照 | UNDET | UNDET | — |
陽性對照 | ≤35 | ≤35 | ≤35 |
6.結果判讀
反應結束自動保存結果，根據分析後圖像調節Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據實際情況自行調整，Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20，調整陰性對照的擴增曲線平直或低于阈值線），點擊Analysis 自動獲得分析結果，在Report 界面觀看結果。
FAM通道 | ROX通道 | CY5通道 | 結果判定 | |
1 | Ct值>40 | Ct值>40 | Ct值<35 | 陰性 |
2 | Ct值≤40 | — | 有或無擴增曲線 | HPV 16型 陽性 |
3 | — | Ct值≤40 | 有或無擴增曲線 | HPV 18型 陽性 |
4 | Ct值>40 | Ct值>40 | Ct值>35 | 複檢：重新取樣檢測 |
【檢驗結果的解釋】
1．實驗室環境污染，試劑污染，樣品交叉污染會出現假陽性結果，如陰性對照檢測為陽性，則需做進一步實驗來确認是哪類污染。如為試劑污染，需開封新的試劑盒再次進行實驗；如為樣品交叉污染，應重複實驗；如為實驗室環境污染，需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。
2．試劑運輸、保存或配制不當會引起試劑檢測性能下降，出現假陰性結果。如陽性對照檢測為陰性，應開封新的試劑盒再進行實驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒僅為定性産品，不做定量測定。
2. 該試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其症狀或體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。
3. 當樣本的病毒含量低于最低檢出限時，可能會出現假陰性。陰性結果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除細菌感染的可能。
【産品性能指标】
1.準确性：企業陽性參考品檢測結果全部為陽性，陽性率為15/15。
2.最低檢測限：該試劑盒HPV16型和HPV18型的最低檢測限均為500copies/mL。
【注意事項】
1．請嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。
2．試劑配制建議在試劑配制區進行，樣品處理要求在生物安全櫃内操作。臨床實驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規範執行。
3．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。反複凍融可能降低試劑盒靈敏度，請按檢測頻次将反應液以适當體積分管保存。
4．反應結束後，擴增管請置于密封袋内丢棄，當日清理，切忌開蓋。
5．不同批号試劑請勿混合使用，請在有效期内使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。